| Autor | Beitrag | ||
     Anonym Bewertung: - |
Hi! Kann mir jemand etwas über die Sequenzanalyse der DNA sagen? | ||
| BioMax (Biomax) Mitglied Benutzername: Biomax Nummer des Beitrags: 11 Registriert: 03-2002 Bewertung: - |
hi Anonym, zur Sequenzanalyse wird meist das sog. "Kettenabbruchverfahren" verwendet. Dabei geht man folgendermaßen vor: Man nehme vier verschiedene Versuchsansätze und gebe dort jeweils die einsträngige zu sequenzierende DNA(ein Stück!) hinein. Dazu kommen DNA-Polymerasen(Enzyme, die aus einem DNA-Einzelstrang einen komplementären Strang ergänzen können) und die vier Nucleotidbausteine. In jedes einzelne der vier Versuchsansätze wird nun eine Sorte radioaktiv markierte leicht veränderter Nukleotide(anderer Zucker) gegeben, so dass man einen Ansatz mit Tymin, einen mit Guanin, Adenin und Cytosin hat. Durch den veränderten Zucker kann die Polymerase-Kettenreaktion(PCR) nur bis zu diesem Nukletidbaustein reagieren, aber nicht weiter. Dort bricht die Kette dann ab. Da die geringe Menge zugesetzter "falscher" Nucleotidbausteine nicht immer an der gleichen Stelle in der Sequenz eingebaut wird, kommt es zur Bildung verschieden langer Doppelstrangstücke. Im Folgenden trennt man die komplementären Stränge wieder und gibt sie in ein Gel. Dieses ist eine Salzlösung, die zwischen zwei Elektroden ausgespannt ist. Da die Proteine elektrisch geladen sind wandern die Einzelstrangketten in dem Gel nun in eine Richtung. Die Geschwindigkeit hängt dabei von ihrer Länge ab. Kurze Stücke sind schneller als lange. Nach einem bestimmten Zeitpunkt kann man dann an der Schwärzung eines aufgelegten Filmes die markierten Nucleotidbausteine identifizieren, die am Ende des Stranges sitzen und zum Abbruch geführt haben. Werden die vier Versuchsansätze nebeneinander auf dem Gel aufgetragen kann man durch die schwarzen Makierungen den einzelnen Streifen seiner Base zuordnen und die genaue Sequenz eines DNA-Abschnittes bestimmen. Ist Deine Frage damit beantwortet? cu BioMax | ||
| Flohbus Unregistrierter Gast Bewertung: - |
Hallo, ich will mich nicht einmischen, aber sorry, so kann man die Antwort nicht stehen lassen. Wenn ich darf mache ich noch ein paar Ergänzungen, ok?! - Zur Sequenzanalyse können methodisch zwei Verfahren unterschieden werden: das oben beschriebene Verfahren nach Sanger (=Didesoxy-Sequenzierung oder Kettenabbruch Verfahren) und/oder die Sequenzierung nach Maxam-Gilbert (Chemische DNA-Sequenzierung) - vier verschiedene Versuchsansätze brauchen nicht verwendet werden, wenn man anstatt Radioaktivität die Didesoxy-Nucleotide (führen zum Kettenabbruch) mit unterschiedlich farbigen Fluoreszenzfarbstoffen markiert. Dies ist heute üblicher und wie gesagt, man benötigt nur einen Ansatz (spart auch DNA). -Das ganze hat nichts mit PCR zu tun!!! PCR ist ein Verfahren zur Vervielfältigung von Nucleinsäuren (DNA) in vitro, also außerhalb der Zelle, synthetisch. Hier werden zwei Primer verwendet und die Amplifikation erfolgt exponentiell. Für eine Sequenzierung nach Sanger verwendet man nur einen Primer und amplifiziert wird streng genommen auch nichts (es kommt ja zum Kettenabbruch). - Das Gel ist keine Salzlösung sondern enthält Salz. Das Salz ist notwendig, damit bei der Elektrophorese (der Auftrennung) überhaupt Strom fließt. Kein elektrischer Strom mit Elektronen, sondern ein Ionenstrom, eben die Salzionen. Das Gel, für Sequenzierungen, besteht aus Polyacrylamid. Man sollte sich am besten das ganze als molekulares Sieb vorstellen. Nichts für ungut. Gruß Flohbus | ||
| BioMax (Biomax) Mitglied Benutzername: Biomax Nummer des Beitrags: 16 Registriert: 03-2002 Bewertung: - |
nagut - vielen Dank für Deine Korekturen. - Wieder was gelernt!  cu | ||
| pmqhyq Unregistrierter Gast Bewertung: - |
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| claris Unregistrierter Gast Bewertung: - |
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| marin Unregistrierter Gast Bewertung: - |
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| tona Unregistrierter Gast Bewertung: - |
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| jessia Unregistrierter Gast Bewertung: - |
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